실 험 보 고 서

실험과제명 ; 명쾌, 여명808 지구자 추출액의 알코올 해독효과 비교

(1) 실험1 ; 혈중 알코올 농도 측정

   <실험방법>

실험동물 ; mouse 30±1g 각 1마리씩 사용

정상군 ; abs. EtOH 0.1ml in 1% CMC 0.3ml 투여

실험군 ; abs. EtOH 0.1ml 투여 30분 후, 시료 3종 경구 투여

                 (경구투여량 ; 20mg in 0.4ml CMC 현탁액)

시료 투여 30분 후, 혈액 채취

   <실험 결과>

대조군(알코올만 투여하고 시료약물은 투여하지 않은 군) ; 0.23%

명쾌 ; 0.16%(30.4% 감소)

여명808 ; 0.19%(17.4% 감소)

지구자 ; 0.30% (30.4% 증가)

   <결론>

명쾌의 효과가 가장 우수하나 mouse 1마리만 사용하였으므로 불확실함.

그러나 경향성은 어느정도 인정됨.

(2) 실험 2 ; 알코올분해효소(미오, ADH) 활성증강효과

   <실험방법>

complex solution (가+나+다)제조(2.5ml)

가. acetaldehyde(2mM);0.011mg/2.5ml

       (0.4ml in 25ml buffer를 만들어 이 중에서 2.5ml을 취함)

나. KCI(0.1M);18.65mg/2.5ml (0.93mg in 2.5ml buffer)

다. Tris-HCI buffer 0.1M(pH 8.0) 25ml

위의 complex solution에 β-NAD⁺(0.5mM) 100㎕, sample(실험군)100㎕, 증류수(대조군)100㎕ 및 ALDH효소 또는 ADH효소 100unit를 증류소 100㎕에 녹여 가하고 25℃에서 1분간 반응 후, 340nm에서 O.D. 측정

(3) 실험3 : 명쾌의 농도별 효소 활성 증강 효과

명쾌의 효과를 농도별로 조사해 본 결과, ADH활성에 미치는 영향은 0.5mg/ml의 농도에서는 대조군에 비해 73.4% 증가하였고 1mg/ml의 농도에서는 86.3% 증가하였다.(Fig.2) ALDH활성에 미치는 영향은 0.5mg/ml의 농도에서는 4.6% 증가하였다.(Fig. 3)

따라서 0.5mg/ml의 농도에서 에탄올을 아세트알데히드로 산화시키는 ALDH활성과 아세트알데히드 (숙취물질)를 아세트산으로 산화시키는 ALDH활성을 모두 강하게 증가시키는 것으로 추정된다.

명쾌ALDH activity (Abs at 340nm)	1.2 1.0 0.8 0.5 0.4 0.2 0
		0            0.5           1
	Concentration(mg/ml)

명쾌ADH activity (Abs at 340nm)	1.0 0.8 0.5 0.4 0.2 0
		0            0.5           1
	Concentration(mg/ml)

Fig 2. 명쾌의 농도별 ADH증가효과             Fig. 3 명쾌의 농도별 ALDH증가효과

<실험결과>

명쾌와 여명 808을 각각 1mg/ml 사용하여 ADH 증가효과를 비교했을 때, 명쾌가 여명808보다 약 7.2배 강한 효과를 나타내었다.(Fig. 1)

ADH activity (Abs at 340nm)	0.8 0.5 0.4 0.2 0
		명 쾌 여명808
	Concentration(mg/ml)

                Fig. 1  명쾌와 여명808의 ADH 활성 증가효과

명쾌 추출물의 농도에 따른 Alcohol Dehydrogenase Activity

에탄올 : 16M NAD : 20mM  효소 : 10unit

실험결과(340nm에서의 흡광도)

	Con	0.50%	0.75%	1.00%	1.50%
1회	0.092→0.102	0.575→0.588	0.784→0.788	1.027→1.032	1.443→1.448
2회	0.091→0.100	0.574→0.584	0.794→0.804	0.995→1.014	1.464→1.471
3회	0.094→0.103	0.565→0.572	0.791→0.800	0.995→0.800	1.465→1.473

흡광도 변화율

	Con	0.50%	0.75%	1.00%	1.50%
1회	0.010	0.013	0.004	0.005	0.005
2회	0.009	0.010	0.010	0.019	0.007
3회	0.009	0.007	0.009	0.013	0.008

The effect of extraction on Yeast acohol dehydrogenase

	Reaction rate	Relative activity
Control	0.9×10-2	100%
0.50%추출물	1.2×10-2	133.30%
0.75%추출물	1.0×10-2	111.10%
1.00%추출물	1.6×10-2	177.80%
1.50%추출물	0.7×10-2	77.80%

효소활성 측정원리

효소의 활성 및 추출물의 영향측정에는

C2H50H+NAD→CH3CHO+NADH+H의 반응을 이용

즉, 알코올의 산화력을 통하여 340nm에서 NADH의 흡광도의 증가율로

추출물이 ADH의 효소활성에 미치는 영향을 검토하였다.

實 驗 報 告 書

實驗課題名 ; 明快, 黎明808 枳俱子抽出液の アルコ-ル 解毒効果 比較

(1) 實驗　1 ; 血の中、 アルコ-ル 濃度 測程

   <實驗方法>

實驗動物 ; mouse 30±1g 各 1匹ずつ使用

正常羣 ; abs. EtOH 0.1ml in 1% CMC 0.3ml 投與

實驗羣 ; abs. EtOH 0.1ml 投與 30分 後, 試料 3種 經口 投與

                 (經口投與量 ; 20mg in 0.4ml CMC 懸濁液)

試料 投與 30分 후, 血液 採取

   <實驗 結果>

對照羣(アルコ-ルだけ 投與して 試料藥物は 投與しなかた　羣) ; 0.23%

明快 ; 0.16%(30.4% 減少)

黎明808 ; 0.19%(17.4% 減少)

枳俱子 ; 0.30% (30.4% 增加)

   <結論>

明快の 効果が 一番 優秀だが、mouse 1匹だけ 使っかたので 不確實

でも、 傾向性は あるくらい 認定

(2) 實驗 2 ; アルコ-ル分解酵素(ALDH, ADH) 活性增强効果

   <實驗方法>

complex solution (a+b+c) 製造(2.5ml)

   a. acetaldehyde(2mM);0.011mg/2.5ml

       (0.4ml in 25ml bufferを 作って この 中、 2.5mlを 取る)

   b. KCI(0.1M);18.65mg/2.5ml (0.93mg in 2.5ml buffer)

   c. Tris-HCI buffer 0.1M(pH 8.0) 25ml

上の complex solutionに β-NAD⁺(0.5mM) 100㎕, sample(實驗羣)100㎕, 蒸溜水(對照羣)100㎕ 及び ALDH酵素とか ADH酵素100unitを 蒸溜水 100㎕にとかして 加えて 25℃で 1分間 反應 後, 340nmで O.D. 測程

(3) 實驗 3 : 明快の 濃度別 酵素 活性 增强 効果

明快の 効果を 濃度別に 調査した結果, ADH活性に及ぶ影響は 0.5mg/mlの 濃度には 對照羣 に比べて 73.4% 增加して、 1mg/mlの 濃度には 86.3% 增加した。(Fig.2)

ALDH活性に及ぶ影響は 0.5mg/mlの 濃度には 4.6% 增加した。(Fig. 3)

したがって 0.5mg/mlの 濃度でエチルアルコ-ルをアセトアルデヒドで 酸化させる ALDH活性と アセトアルデヒド(熟醉物質)をアセット酸で 酸化させる ALDH活性を ぜんぶ 强く增加させることに 推定。

明快ALDH activity (Abs at 340nm)	1.2 1.0 0.8 0.5 0.4 0.2 0
		0            0.5           1
	Concentration(mg/ml)

明快ADH activity (Abs at 340nm)	1.0 0.8 0.5 0.4 0.2 0
		0            0.5           1
	Concentration(mg/ml)

Fig 2. 明快の 濃度別 ADH增加効果             Fig. 3 明快の 濃度別 ALDH增加効果

<實驗結果>

明快と 黎明808を 各各 1mg/ml 使って ADH 增加効果を 比較した 時, 明快が 黎明808より 約 7.2倍 强い 効果を現わした。(Fig. 1)

ADH activity (Abs at 340nm)	0.8 0.5 0.4 0.2 0
		明　快 黎明808
	Concentration(mg/ml)

                Fig. 1  明快と 黎明808の ADH 活性 增加効果

明快 抽出物の 濃度による Alcohol Dehydrogenase Activity

エチルアルコ-ル : 16M 　　　NAD : 20mM  　　　酵素 : 10unit

實驗結果(340nmでの 吸光度)

	Con	0.50%	0.75%	1.00%	1.50%
1回	0.092→0.102	0.575→0.588	0.784→0.788	1.027→1.032	1.443→1.448
2回	0.091→0.100	0.574→0.584	0.794→0.804	0.995→1.014	1.464→1.471
3回	0.094→0.103	0.565→0.572	0.791→0.800	0.995→0.800	1.465→1.473

吸光度 變化率

	Con	0.50%	0.75%	1.00%	1.50%
1回	0.010	0.013	0.004	0.005	0.005
2回	0.009	0.010	0.010	0.019	0.007
3回	0.009	0.007	0.009	0.013	0.008

The effect of extraction on Yeast acohol dehydrogenase

	Reaction rate	Relative activity
Control	0.9×10-2	100%
0.50%抽出物	1.2×10-2	133.30%
0.75%抽出物	1.0×10-2	111.10%
1.00%抽出物	1.6×10-2	177.80%
1.50%抽出物	0.7×10-2	77.80%

酵素活性 測程原理

酵素の 活性 及び 抽出物の 影響測程では

C2H50H+NAD→CH3CHO+NADH+Hの 反應を 利用

卽, アルコ-ルの 酸化力を 通じて 340nmで NADHの 吸光度の 增加率で

抽出物が ADHの 酵素活性に 及ぶ影響を 檢討した。